動物組織和細胞基因組 DNA 提取試劑盒

Tissue Genomic DNA Extraction Kit

（快速型）（適合從動物組織和細胞中提取基因組 DNA）

試劑盒組成 :50 (50 次)

儲存條件：本試劑盒在室溫（15-25 ℃）下可保存一年。

產(chǎn)品特點：TM Tissue Genomic DNA Extraction Kit 采用*的疏水膜技術(shù)，高效去除組織蛋白等各種干擾物，提取高純度的 DNA。試劑盒采用*的緩沖系統(tǒng)，可從多種不同類型動物組織和細胞中快速速提取基因組DNA。

注意事項：

1.實驗前準(zhǔn)備工作：在實驗開始前，詳細閱讀該手冊熟悉各步驟，并準(zhǔn)備好所有的試劑盒組分，1.5 ml 和 2 ml 滅菌離心管，以及 37 ℃和 65 ℃ 的溫浴條件。

2.KBL1 和KW1 在低溫時可能產(chǎn)生混濁或沉淀，可在37-50℃溫浴片刻。

3.Buffer KW *次使用前請按瓶上標(biāo)簽加入 50 ml 無水乙醇。每次使用后，請立即擰緊蓋子。

操作步驟：

（一）平衡吸附柱

1.取一 TM Mini Column 柱裝在一個 2 ml 收集管上（已備）。加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子內(nèi)，室溫 13 000 rpm 離心 1 min，使平衡液*流過柱子。棄收集管中的濾液，將空柱套回收集管內(nèi)。

注意：柱子不平衡，將導(dǎo)致 DNA 產(chǎn)率減少。

（二）樣品處理

2.A. 組織破碎:  可根據(jù)不同樣品選擇以下方法：

1)液氮研磨: 組織直接放入研缽中，加入少量液氮，迅速研磨，待組織變軟，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按 5-50 mg 組織/1ml 加入 KBL1，

混勻，靜置 2 min, 轉(zhuǎn)入離心管, 13,000 rpm, 常溫離心，2  min (低溫可能造成

KBL1 結(jié)晶,應(yīng)在 50℃下保持 KBL1 溶解狀態(tài))。

2)直接研磨: 對于新鮮的動物組織, 可以按照 5-50 mg 組織/1ml 加入

KBL1，直接研磨后,轉(zhuǎn)入離心管, 13,000 rpm 常溫離心，2 min。

3)勻漿：組織樣品按每 5-50 mg 組織加入 1 ml KBL1。用電動勻漿器充分勻漿約需 1-2 分鐘。勻漿液轉(zhuǎn)入離心管, 13,000 rpm  常溫離心，2 min。(效果，強烈推薦)

B. 裂解細胞：培養(yǎng)貼壁細胞：不須消化，可直接用 KBL1 進行消化、裂解，KBL1 體積按 10 cm2/ml 比例加入； 懸浮細胞可直接收集、裂解，每1ml KBL1 可裂解 5×106 動物細胞, 裂解液加入后，靜至 2min. 轉(zhuǎn)入離心管, 13,000 rpm 常溫離心，2 min。

注意：基因組 DNA 的純度取決于 KBL1 的體積和標(biāo)本的量，理論上KBL1 的體積越大，標(biāo)本的量越少， DNA 質(zhì)量越好！ 不同的組織有不同的比例，請在正式實驗前摸索。

（三）吸附

3.將上清液或裂解液轉(zhuǎn)移到已平衡過的吸附柱內(nèi)，室溫 13 000 rpm 離心 30 s，使裂解液*流過柱子。保留柱，棄去收集管中的過濾液，將吸附柱重新放入收集管。

注意：1）室溫太低可能造成 KBL1 混濁或沉淀，在 37 ℃溫浴片刻即可。 2）如混合液體積過大，可以分成數(shù)次上柱，每次上樣量不要超過 700 μl。

4.（可選）加入 30 μl  濃度為 20-50 μg/ml 的RNase A  于柱的膜上，37 ℃放置 5-10 min。

注意：本試劑盒沒有配備 RNase A 溶液。一般來說，這一步?jīng)]有必要， 因為本試劑盒的純化柱對 RNA 沒有吸附能力。如果實驗要求不能殘留微量RNA，可采用這一步處理。

(四) 漂洗

5.加入 700 μl Buffer KW1，室溫 13 000 rpm 離心 30 s，棄去收集管中的過濾液，保留柱。

6.加入 700 μl Buffer KW，室溫 13 000 rpm 離心 30 s，棄去收集管中的過濾液，保留柱。

注意：Buffer KW 在*使用之前必須加入 50 ml 無水乙醇，并置于室溫下保存。

7.（可選）重復(fù)用 700 μl 70%乙醇（室溫）洗滌柱子。室溫 12 000 rpm

離心 1 min。

8.棄收集管中的濾液，將空柱套回 2 ml 收集管內(nèi)。室溫下，高轉(zhuǎn)速或 13 000 rpm 離心 2 min 以甩干柱子基質(zhì)殘余的液體。

注意：此步驟不可省，否則將導(dǎo)致乙醇殘留于 DNA 中，影響后續(xù)反應(yīng)。

(五)洗脫

9.把柱子裝在一個新的 1.5 ml 離心管上，加入 50 μl 的 KE（可用滅菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0 或純水代替，純水可預(yù)先用 NaOH 調(diào) pH 值至 8.0），65 ℃放置 5-10 min，13 000 rpm 離心 1 min 以洗脫 DNA。（也可以將 KE 預(yù)熱至 65℃，再加至膜上，可以減少放置時間至 1min）

注意：小心加 KE 到柱中吸附膜的中間部位，并確保液體將膜全部覆蓋。

10.DNA 可保存于 4 ℃，若長時間保存，可凍存于-20 ℃。

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