手足口EV71-IgM抗體快速檢測(cè)試劑盒

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 手足口EV71-IgM抗體快速檢測(cè)試劑盒

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1。喺醫(yī)德委員會(huì)頒布嘅指南下，知情同意獲得供體血。
2。用FICOLL酰胺化物離心分離架嘛！單個(gè)椗細(xì)胞組分。
三。B細(xì)胞通過(guò)陽(yáng)性選擇免疫磁性分離架嘛，CD19陽(yáng)性選擇細(xì)胞用分離架嘛！-A珠由珠中釋放。
4。或者，用Dyal-KIT試劑盒分離架嘛B細(xì)胞，基于非B細(xì)胞嘅耗盡（陰性選擇）。
5。陽(yáng)性同陰性揀嘅陽(yáng)性率勒分別為98.5±0.5%同93.8±1.3%純B細(xì)胞，用FITC識(shí)認(rèn)嘅抗CD19單株抗體染色同流式細(xì)胞術(shù)分析淋巴細(xì)胞門控細(xì)胞喺配備CellQuest軟件嘅FACSCALBURC上進(jìn)行評(píng)估。
B細(xì)胞培養(yǎng)
1。通過(guò)如上所述嘅陽(yáng)性或者陰性選擇方法分離架嘛B細(xì)胞，并與四聚訂HLA-A2/HPV（100 ng／106細(xì)胞）喺雪上哺育40分鐘，洗滌，并無(wú)菌噉喺FasvStAsEse SE（BD BioScIsS）中進(jìn)行PE染色。
2。PE染色強(qiáng)度超過(guò)溝條數(shù)十嘅細(xì)胞畀偏轉(zhuǎn)，喺96窿板中直頭喺一窿窿/中接種，EL4.B5細(xì)胞（五十Gy照射，5×104／阱同T細(xì)胞上清液）。
三。通過(guò)喺5μg/ml PHA同10 ng/ml PMA存在下，喺公供體培養(yǎng)36鐘培養(yǎng)E-玫瑰花埋T細(xì)胞，惹到T細(xì)胞上清液。
4。B細(xì)胞上清液（100μL）喺第9日同第16日有冇收集。
5。用酵素聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)所有上清液中抗HLA-Ab嘅表達(dá)同IgG同IgM嘅上清液。
6。啲上清液測(cè)試結(jié)合鏈霉親和素。