西尼羅河病毒熒光玻片法檢測試劑盒
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西尼羅河病毒熒光玻片法檢測試劑盒，2002年8月2日,美國南部路易斯安那政府宣布全州進(jìn)入緊急狀態(tài),控制正在該州迅速擴(kuò)散的“西尼羅河病毒“。
- 產(chǎn)品描述
西尼羅河病毒熒光玻片法檢測試劑盒
廣州健侖生物科技有限公司
檢查
1.實驗室檢查
白細(xì)胞數(shù)減少，腦炎型者腦脊液中淋巴細(xì)胞增多，蛋白增高。
2.免疫學(xué)檢查
利用血清學(xué)抗體檢測方法，常用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實驗）法，采用患者急性期和恢復(fù)期雙份血清，兩份血清同時進(jìn)行檢測，以恢復(fù)期血清較急性期特異性IgG抗體滴度升高4倍以上為陽性，有助于本病的診斷。
3.病原學(xué)檢查
自潛伏末期至發(fā)病后第5天，從患者血液或腦脊液中分離出病毒，陽性率較高，對新分離病毒的鑒定一般采用已知血清進(jìn)行中和實驗。
4.分子生物學(xué)檢查
RT-PCR（逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)）法檢測，通過設(shè)計西尼羅河熱病毒特異引物對血清或腦脊液標(biāo)本進(jìn)行RT-PCR試驗，陽性率高，具有特異性診斷價值。
用途
西尼羅(WN)病毒IgG ELISA，利用了西尼羅重組抗原檢測人體血清或血漿中的西尼羅抗體。本實驗僅用于輔助診斷人感染了西尼羅病毒，不用于篩查血液或血液成分。僅供專業(yè)人員體外診斷使用。
概述
感染了西尼羅病毒會導(dǎo)致包括腦炎等一系列癥狀的疾病，西尼羅病毒在世界廣泛傳播，已在50多個國家檢測出該病毒。本試驗經(jīng)CDC提供的試劑檢驗與驗證。本試驗使用了一種稱為WNRA的重組抗原，它可以作為西尼羅病毒感染的快速血清學(xué)指標(biāo)，WNRA蛋白是一種重組抗原，它是由含有西尼羅病毒兩個抗原的序列多肽構(gòu)成。
實驗的原理
檢測西尼羅病毒IgG ELISA 是基于兩步夾心法原理制造的。
提供的材料
- 微孔板（96孔 12x8）：即用 每孔均包被結(jié)合西尼羅重組抗原的單抗。2－8℃下保存至保質(zhì)期。
注意：WNRA和NCA已包被于微孔板。
- IgG樣品稀釋液：1支 25ml 即用 2-8℃下保存至使用。
- IgG陰性質(zhì)控：1支 30ul 2-8℃下保存至使用。要長時間儲存，將其分裝于小瓶里，在-70℃下儲存。
- IgG陽性質(zhì)控：1支 30ul 2-8℃下保存至使用。要長時間儲存，將其分裝于小瓶里，在-70℃下儲存。
- 洗滌液（10X）：1瓶 120ml 2－8℃下保存至使用。
- EnWash：1瓶 20ml 2－8℃下保存至使用。
- 酶聯(lián)物：一瓶6ml 即用 2－8℃下保存至使用。
- TMB底物液： 1支 9ml 即用 2－8℃下保存至使用。
- 終止液；1支6ml 即用 2－8℃下保存至使用。
試劑應(yīng)避免反復(fù)凍融。
西尼羅河病毒熒光玻片法檢測試劑盒
操作步驟：
- 標(biāo)記將要使用的板條，注意微孔板已經(jīng)按照統(tǒng)一排列，如下所述包被西尼羅抗原和質(zhì)控抗原。
西尼羅抗原 |
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板條＃1 | 板條＃2 | |
A | WNRA | WNRA |
B | WNRA | WNRA |
C | WNRA | WNRA |
D | WNRA | WNRA |
E | NCA | NCA |
F | NCA | NCA |
G | NCA | NCA |
H | NCA | NCA |
- 將血清樣品﹑陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控同樣地用樣每孔加入50ul稀釋后的樣品，以下為一個血清樣品使用一個板條的*。
- 品稀釋液按1：300稀釋。
| 板條1 | 板條2 | |
血清樣品 | |||
A | IgG N | 樣品1 | |
B | IgG N | 樣品1 | |
C | IgG P | 樣品2 | |
D | IgG P | 樣品2 | |
E | IgG P | 樣品2 | |
F | IgG P | 樣品2 | |
G | IgG N | 樣品1 | |
H | IgG N | 樣品1 | |
- 封板，在濕潤的溫育器里37℃下溫育1小時。
- 溫育后，用自動洗板機(jī)，使用洗滌液洗板6次。
- 在每孔中加入50ul的酶聯(lián)物。
- 封板，在濕潤的溫育器里37℃下溫育1小時。
- 溫育后，用自動洗板機(jī)，使用洗滌液洗板6次。
- 每孔加入150ul的EnWash，在室溫下溫育5分鐘
- 溫育后，用自動洗板機(jī)，使用洗滌液洗板6次。
- 每孔加入75ul的TMB底物液。
- 封板，在室溫下，避光處溫育10分鐘。
- 每孔加入50ul的終止液終止反應(yīng)。
- 在450nm處讀取吸光率。
結(jié)果的計算
結(jié)果的變化將會非常大，以下結(jié)果僅供指引。
計算ISR值：
計算在同一實驗里WNR抗原的兩個陰性質(zhì)控的平均值，計算同一實驗里NC抗原的兩個陰性質(zhì)控的平均值，用WNRA/NCA，得出陰性質(zhì)控的ISR值。同樣地計算陽性質(zhì)控和樣品得ISR值，陽性質(zhì)控的ISR值應(yīng)高于3.0，陰性質(zhì)控的ISR值應(yīng)低于1.5。
結(jié)果的判斷：
ISR | 結(jié)果 | 解釋 |
≤2.0 | 陰性 | 沒有檢測到IgG抗體 |
2.0－3.0 | 可疑 | 需確證實驗 |
≥3.0 | 陽性 | 存在IgG抗體，建議做確定性實驗 |
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若于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h，呈均勻混濁，后期 可因產(chǎn)生自溶而變得澄清。甲型溶血性鏈球菌不產(chǎn)生自溶 酶，故加入膽鹽等表面活性劑不能溶解，利用此特點可鑒 別甲型溶血性鏈球菌與肺炎鏈球菌。肺炎鏈球菌在血瓊脂 平板上菌落周圍形成α溶血環(huán)。細(xì)菌生長的能量來源于分 解葡萄糖，伴隨乳酸的形成。乳酸的堆積會抑制細(xì)菌的生 長，故間斷性加入堿可使肺炎鏈球菌大量繁殖。Optochin 可抑制肺炎鏈球菌生長。該菌可分解多種糖類，產(chǎn)酸不產(chǎn) 氣。膽汁溶解試驗陽性、Optochin敏感試驗陽性。大多數(shù) 新分離出的肺炎鏈球菌可發(fā)酵菊糖，故菊糖發(fā)酵試驗在鑒 別肺炎球菌與甲型溶血性鏈球菌時有一定的參考價值。抗 原構(gòu)造編輯莢膜多糖抗原存在于肺炎鏈球菌莢膜中。根據(jù) 莢膜多糖抗原性的不同將肺炎球菌分為91個血清型。菌體 抗原⑴C多糖：存在于肺炎鏈球菌細(xì)胞壁中，具有種特異性 ，為各型菌株所共有。C多糖可被血清中C-反應(yīng)蛋白沉淀。 在鈣離子存在時，C多糖可與正常人血清中稱為C-反應(yīng)蛋白 （C reactive protein,CRP）的β球蛋白結(jié)合，發(fā)生沉淀 。⑵M蛋白：具有型特異性。
