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新聞中心
登革熱試劑盒反應的五個要素點擊次數(shù)：561 更新時間：2022-09-15
登革熱試劑盒是用來定性檢測人血清、血漿和全血中的登革熱病毒IgM和IgG抗體的方法。這方法能用來鑒別初次和二次感染。它僅能用來檢測具有臨床登革熱癥狀的病人的樣本。結(jié)果是假定陽性的，必須經(jīng)病毒分離、雙份血清分析、免疫組織化學檢測抗原或病毒核酸檢測證實有登革熱病毒感染。
登革熱病毒PCR檢測試劑盒反應五要素:參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP.模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應遵循以下原則:
?、僖镩L度:15-30bp.常用為20bp左右。
?、谝飻U增跨度:以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
?、垡飰A基:G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免弓|物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引|物間互補，特別是3端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的打增條帶。
?、菀?端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
?、抟镏杏谢蚰芗由虾线m的酶切位點，被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點，這對酶切分析或分子克隆很有好處。
?、咭锏奶禺愋?引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umo或10~100pmol,以弓|物量“生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會弓|起錯配和非特異性擴增，且可增加弓|物之間形成二聚體的機會。
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